PCR，RT-PCR相关酶	修饰酶	限制性内切酶	常用生化试剂

PCR，RT-PCR相关酶

Taq DNA聚合酶	M-MLV Transcriptase( 反转录酶 )
Pfu DNA聚合酶	AMV Transcriptase(反转录酶)
金牌DNA聚合酶（热启动酶）	Rnasin(RNA酶抑制剂 )
TthDNA聚合酶	UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)
dNTP	常用的生化酶稳定剂价格表
Taq酶抗体(单克隆)	Bst DNA聚合酶(大片段)LAMP等温扩增
SDS-PAGE预制胶	RiboGreen荧光染料
EvaGreen荧光染料	Goldview荧光染料
SYBR Green II荧光染料	新冠病毒核酸检测试剂盒
核酸纯化柱	新冠病毒引物探针

蛋白酶K（大量供应用于核酸提取纯化)-PCR级

    蛋白酶K是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌（tritirachium album limber）中纯化得到。据资料显示：该酶有两个ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。所以，蛋白酶k消化过程中通常加入edta（以抑制依赖于mg2+的核酸酶的作用）。但是，如果要消化对蛋白酶k具有较强耐性的蛋白，如角蛋白一类，则可能需要使用含有1mmol/l ca2+而不含edta的缓冲液。在消化完毕后、纯化核酸前要加入EDTA（ph8.0）至终浓度为2mmol/l,以鳌合ca2+。
　　蛋白酶K，是一种切割活性较广的丝氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽键。此酶经纯化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿素和SDS中稳定，还具有降解天然蛋白质的能力，因而它应用很广泛，包括制备脉冲电泳的染色体DNA，蛋白质印迹以及去除DNA和RNA制备中的核酸酶。蛋白酶K的一般工作浓度是50—500μg/ml。在较广的pH范围内（pH 4-12.5）均有活性。
    推荐反应缓冲液：50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2 。
    20mg蛋白酶K用1ml贮存液或ddH2O完全溶解,不要涡旋混合，然后分装成小份贮存于-20℃。 贮存液：20mM Tris-HCl (pH7.5),1mM CaCl2，50%甘油,0.03%Proclin300,该配方在常温下可放置2周，酶活不会发生变化。

应用：

• 基因诊断试剂盒基因组DNA提取试剂盒
• RNA提取试剂盒中去DNARNA制备中的核酸酶
• 提取组织中非蛋白成份降解含有蛋白质的杂质-譬如DNA疫苗和肝素的制备
• 蛋白酶K的一般工作浓度50-500ug/ml

储存：
　　干粉状态可在0~4℃条件下低温保藏。溶解后分装为适当体积，-20℃贮存。运输可在室温下进行。正确的贮存条件下，干粉状态的有效期可达一年。液体状态在-20℃有效期为半年。打开包装使用后，如果在2~8℃环境下放置超过一周时间，建议过滤除菌或增加稳定剂如0.03%Proclin300，防止微生物污染。
贮存和稀释缓冲液：20mM Tris-HCl缓冲液,1mM CaCl2 (pH 7.5),0.03%Proclin300。
反应条件：反应缓冲液中37-56℃温育10-30min

推荐几种反应结合液：
Buffer1: 30 mM Tris·Cl(pH 8.0); 30 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.5% Triton X-100; 800 mM GuHCl
Buffer2: 36 mM Tris·Cl(pH 8.0); 36 mM EDTA; 5% Tween 20; 0.36% Triton X-100; 735 mM GuHCl
备注：

1  蛋白酶K的推荐工作浓度为0.5-1mg/ml,0.2%-1%SDS或1-4 M尿素可刺激该酶的活性。
2  Ca2+可以保护蛋白酶K不会自我降解、增加蛋白酶K的热稳定性、调节蛋白酶K的底物结合位点。
3  在宽pH值（4.0-12.5）范围内保持稳定，最佳pH值范围是7.5-8.0。

参考文献：
1. Kraus, E; et.al. Proteinase K from the Mold Tritirachium album limber, Specificity and Mode of Action. Z. Physiol. Chem., 357:939; 1976.
2. Jany,KD, et al. Amino Acid Sequence of Proteinase K from the Mold, Tritirachium album limber. Proteinase K; a Subtilisin-related Enzyme with Disulfide Bonds. FEBS Letter, 199,139.1986.
3. Sambrook, J., Fritsch, E.F. and Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Volume 3, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY, B.16.
4. Sweeney, P.J. and Walker, J.M. (1993) Enzymes of molecular biology. In: Methods in Molecular Biology, Vol. 16, M.M. Burrell, ed., Humana Press, Inc., Totowa, NJ, 305.

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