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酶类

PCR，RT-PCR相关酶	修饰酶	限制性内切酶	常用生化试剂

PCR，RT-PCR相关酶

Taq DNA聚合酶	M-MLV Transcriptase( 反转录酶 )
Pfu DNA聚合酶	AMV Transcriptase(反转录酶)
金牌DNA聚合酶（热启动酶）	Rnasin(RNA酶抑制剂 )
Tth DNA聚合酶	UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)
dNTP	热敏UNG酶
Taq酶抗体(单克隆)	常用的生化酶稳定剂价格表
SDS-Page预制胶	Bst DNA聚合酶(大片段)LAMP等温扩增
EvaGreen荧光染料	RiboGreen荧光染料
SYBR Green II荧光染料	Goldview荧光染料
内参抗体	标签抗体
新冠病毒核酸检测试剂盒	荧光标记二抗体
	新冠病毒S1蛋白

pGEM T载体

pGEM-T载体

DH5α感受态细胞(仅供应上海地区）

感受态细胞

高温聚合酶简介

随着分子生物学研究发展的不断广泛和深入， PCR 已成为一门相当成熟的常规技术，而热聚合酶（即 Taq 酶）的合理选择是 PCR 成败与否的一个关键因素，目前市面上有多种 Taq 酶，能够满足多方面的实验需要，那么，如何选择最合适自己实验的 Taq 酶呢？根据用户经常考虑的指标，如特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度、能否进行复杂模板扩增以及优化条件难易等等，我们在这儿将主要的几种 Taq 酶进行简单的归类比较。

高保真Taq酶
  保真性的一个通用标准是错配率，错配率越低保真性越好。普通 Taq 酶的错配率在 10 -5 碱基 / 循环数，而高保真 Taq 酶错配率可降到 10 -6 数量级，大大降低了出错的可能性；它适合对 PCR 保真性要求较高的实验，如基因筛选、测序、突变检测等等。高保真 Taq 酶的保真原理是：高保真 Taq 酶具有 3' 到 5' 核酸外切酶（ Proofreading ）的活性， PCR 扩增途中如果产生了错配的碱基，它可以将其切掉，从而保证了扩增的准确性；需要提醒用户的是由于此酶具有核酸外切酶功能，往往扩增效率低一些，有的还会降解引物，而且产物一般不宜用 TA 或 UA 克隆法克隆。目前市面上主要有两类产品：一类是混合型的高保真酶，将带有 Proofreading 活性的酶与普通 Taq 酶（用于提高扩增效率）混合起来；另一类是单一型的高保真酶。

热启动Taq酶（高特异Taq酶）

影响 PCR 特异性的因素很多，包括模板、引物性质及质量、反应条件的控制等等，而高特异性 Taq 酶的出现大大减少了摸条件这一繁琐的实验过程，也为 PCR 产物快速有效的纯化（ PCR 产物直接纯化）打下了基础；这类酶最典型的代表是热启动 Taq 酶。大家都知道，在 PCR 第一个循环变性之前，有一个升温的过程，引物和模板会有一些非特异性配对，如果这时 Taq 酶发挥活性，就很容易产生非特异性扩增，由于循环初期模板量非常少，产生的非特异性条带经过后面的指数扩增，就会严重干扰目的片段的扩增，甚至导致特异性条带不能扩出；而热启动 Taq 酶是必需经过高温才能激活的酶，因此在初始循环的变性之前它没有活性，不会产生非特异性扩增，这就大大提高了 PCR 扩增的特异性。第一代热启动 Taq 酶往往直接在 Taq 酶上做一些辅助修饰，比如用 Taq 酶抗体抑制剂、固体石蜡封闭等，但抗体、固体石蜡等异物的掺入，会对实验造成一定的负面影响；新一代的热启动 Taq 酶是通过内部改造的基因重组酶，它真正实现便利的热启动，无需别的辅助抑制物，也不用担心抑制剂不稳定，使用起来十分方便、高效，是临床 PCR 诊断试剂的理想选择。 此外，热启动的 Taq 酶也是实现一步法 RT-PCR 的基础，在 RT 反应较低温度下， Taq 酶没有活性，逆转录酶发挥活性； RT 反应结束，高温灭活逆转录酶的同时，激活 Taq 酶，进行 PCR 反应。

高耐热Taq酶
    对于有些模板变性温度较高，需要时间较长，可能要求高耐热性 Taq 酶，如 NEB 公司的 Vent 和 Deep Vent DNA 聚合酶系列，两者都是从海底火山口分离出来后克隆的，是普通 Taq 酶耐热性的三倍以上，前者在 95°C 半衰期近 7 小时， 100°C 近 2 小时；而后者分别为 23 小时和 8 小时。
超长片段扩增Taq酶
   对于作基因组图谱、测序及分子遗传学研究的用户，可能会用到超长片段的扩增， Clontech 公司的 Advantage Genomic 系列混有 Tth DNA 聚合酶， Proofreading 酶和热启动抗体，对复杂模板可扩增 10kb 片段，简单模板可达 40kb 。
关于复杂模板的扩增
   对于模板结构复杂，如 GC 含量高（ >60% ），有二级结构等，普通的 Taq 酶可能难以延伸下去，加入 DMSO 等助熔剂可帮助扩增顺利进行，但 DMSO 有毒，而且用量需要优化。 QIAGEN 公司的任何一种 Taq 酶都附有特制的 Q- 溶液，操作方便、安全，对复杂模板的扩增特别有效。

PowerQ®qTaq DNA聚合酶

         
用途

Taq酶主要用于对保真性要求不高的PCR扩增和荧光定量PCR，为方便用户对镁离子浓度的调整，所有的buffer都是不含镁离子的，镁离子单独包装。

Taq酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经三次过柱纯化分离出来的一个约 94 KD 的重组蛋白。

•  具有 5' 到 3‘合成 DNA 的能力；无3 '到 5‘外切酶的活性。

•  具有 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 特别适合用于荧光定量PCR 。

•  具有 3‘端加 A 的功能，产物经纯化后可直接用于T－A克隆。

•  无外源核酸酶和细菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 检测，纯度＞ 95% 。

•  最佳延伸温度 72 ℃ ，最佳 Mg 2+ 浓度 1.5mM ，最佳 dNTPS 浓度 0.2mM , 延伸速度为 2000base/min 。

•  10 × PCR buffer: 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 1% TritonX-100 和 15mM MgCl2 。

•  Storage buffer: 20mM Tris-HCl (pH 8.0), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50%甘油， 0.5% Nonidet -P40 和 0.5% Tween20 。

Taq酶单位定义

在 74℃ 条件下， 30 分钟内催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为： 50mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未标记和标记 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 终反应体积为 50ml 。

Taq酶（大宗用户价格面议，电话：021－54460831）

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2XTaq PCR MasterMix

2xTaq PCR MasterMix

Taq酶抗体(单克隆)

Size:100ul,for 500 units of Taq polymerase
Price:￥300.00
Taq酶抗体(单克隆)说明书
主要用于热启动Taq酶的制备、热启动PCR实验,可以增强荧光PCR的灵敏度和特异性。

Pfu酶用途

主要用于对 PCR 保真性要求较高的实验，如基因筛选、克隆表达、突变检测、定点突变等等。

Pfu酶特征

•  克隆有 Pyrococcus Furiosis DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经三次过柱纯化分离出来的一个约 90 KD 的重组蛋白。

•  具有 5' 到 3 ‘合成 DNA 的能力；有 3 '到 5 ‘外切酶的活性即纠错能力，通俗地说，出错的机率是普通 Taq 酶的十分之一。为了减少由 3′-5′ 外切酶活性引起的引物降解，闪晶公司强烈推荐在冰浴上添加所有的试剂并且在温度达到 60 -65°C 时再加入 Pfu DNA 聚合酶以便进行热启动或者在冰浴上添加试剂后放在预热到 95°C 的 PCR 仪上。

•  无 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 不能用于实时荧光PCR 。

•  无 3 ‘端加 A 的功能，产物为平端，如果需要做 T － A 克隆，需要做添 A 实验。

•  无外源核酸酶和细菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 检测，纯度＞ 95% 。

•  最佳延伸温度 72 ℃ ，最佳 Mg 2+ 浓度 2.0mM ，最佳 dNTPS 浓度 0.2mM ，延伸速度为 600base/min ； Pfu DNA 聚合酶比 Taq DNA 聚合酶的延伸反应速率低，因此闪晶公司推荐延伸反应时间为每 kb 需 2 分钟。

•  10 × PCR buffer: 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 1% TritonX-100 和 20mM MgSO4 。

•  Storage buffer: 20mM Tris-HCl (pH 8.0), 100mM KCl, 0.1mM EDTA, 1mM DTT, 50% 甘 油， 0.5% Nonidet -P40 和 0.5% Tween20 。

Pfu酶单位定义

在 74℃ 条件下， 30 分钟内催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为： 50mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未标记和标记 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 终反应体积为 50ml 。

Pfu酶　（大宗用户价格面议，电话：021－54460831）

金牌酶（热启动酶）

金牌酶用途

主要用于 PCR 扩增和一步法 RT － PCR ；特别适合临床 PCR 诊断试剂，这样可以降低运输条件和降低对临床操作人员的要求。

金牌酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，经过化学修饰，再经三次过柱纯化分离出来的重组蛋白。

•  在常温下没有聚合酶的活性，需经过 95 ℃ 4mins 的高温造成化学修饰基团的脱落，然后才有聚合的活性；这样就避免在低温阶段的非特异性扩增；大大提高了 PCR 反应的灵敏度和特异性。随着 PCR 扩增的进行，酶活性会被逐步释放，这样就有效提高扩增效率及产物量。

•  具有 5' 到 3 ‘合成 DNA 的能力；无 3 '到 5 ‘外切酶的活性。

•  具有 5 ' 到 3 ‘外切酶的活性， 可用于实时荧光 PCR 。

•  具有 3 ‘端加 A 的功能，产物经纯化后可直接用于 T － A 克隆。

•  无外源核酸酶和细菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 检测，纯度＞ 95% 。

•  最佳延伸温度 72 ℃ ，最佳 Mg 2+ 浓度 1.5mM ，最佳 dNTPS 浓度 0.2mM , 延伸速度为 2000base/min 。

金牌酶单位定义

在 74℃ 条件下， 30 分钟内催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为： 50mM Tris-HCl (pH8.3 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 5mM MgCl2, 200mM dNTP( 含未标记和标记 [3H] dTTP ), 10mg 活化的小牛胸腺 DNA 和 0.1mg/ml BSA, 终反应体积为 50ml 。

金牌酶(热启动酶)　（大宗用户价格面议，电话：021－54460831）

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Tth DNA 聚合酶

用途

主要用于 PCR 扩增和一步法 RT － PCR ；它同时具有 DNA 聚合酶的活性和反转酶的活性；可用于实时 PCR 。

特征

•  Tth DNA 聚合酶是一种热稳定性酶，分子量为 92kDa ，从 Thermus thermophilus HB-8 中分离。

•  在 74℃ 时可进行 DNA 复制，在 95℃ 的半衰期为 20 分钟。

•  Tth DNA 聚合酶在镁离子存在的条件下可催化核苷酸沿 5'—3' 方向发生聚合反应，形成双链 DNA ，也可在镁离子存在的条件下，以 RNA 为模板沿 5'—3' 方向发生核苷酸聚合反应。

•  该酶也具有 5' － 3' 外切酶活力，无 3' － 5' 外切酶活力， 可用于实时荧光 PCR 。

•  能在较高的温度下进行逆转录，增加了引物杂交和延伸的特异性；减少了由于 RNA 二级结构引起的问题。

•  10× 逆转录反应缓冲液： 100mM Tris-HCl (pH 8.3 ， 25℃ ), 900mM KCl ； 10×PCR 反应缓冲液： 500mM KCl, 100mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ) 和 1 ％ Triton X-100 。

•  无外源核酸酶和细菌 DNA 污染。

•  SDS － PAGE 检测，纯度＞ 95% 。

单位定义

在 70℃ 条件下， 30 分钟内催化 10nmol dNTP 的掺入反应成为 TCA 不溶性物质所需的酶量为一个单位。反应条件为： 50mM Tris-HCl (pH 9.0 ， 25℃ ), 50mM NaCl, 10mM MgCl2, 200mM dNTP ( 含未标记和标记 [3H] dTTP ), 活化的小牛胸腺 DNA 作为底物。

UNG酶(尿嘧啶DNA糖基化酶)

UNG酶用途

因PCR是一种极敏感的扩增技术，易受污染的影响。小量的外源 DNA 污染可以与目的模板一块被扩增。当前一次扩增产物用来进行新的扩增反应时，会发生共同来源的污染，这称之为残余污染；从其他样品中纯化的 DNA 或克隆的 DNA 也会是污染源。卫生部已经明确规定，凡是用于临床检验的PCR试剂，都应该有 UNG酶技术，以防止污染。

控制污染的方法主要有两种：

1 、在 PCR 实验过程中使用良好的实验步骤和实验环境减少残余污染：使用抗气雾剂移液管的阻止气雾剂进入 eppendorf 管内；为 PCR 样品配制和扩增后分析设计隔离的区域；在准备新反应前更换手套；总是使用不含有模板的阴性对照检测污染；使用预先混合的反应成分，而不是每个反应的每个试剂单独加入。

•  使用尿嘧啶DNA糖基化酶（UDG酶），这种酶（也称为尿嘧啶 -N- 糖基化酶或UNG酶）移除 DNA 中的尿嘧啶，在PCR反应液配制时，将dUTP和dTTP 按一定的比例混用，使得扩增产物含有脱氧尿嘧啶，这种产物对 UNG 敏感，所有可以在PCR前对新配制的反应用 UNG 处理以破坏残余产物，杜绝污染。

UNG酶特征

•  克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表达后，再经三次过柱纯化分离出来的重组蛋白。

•  50ul 体系中，加入0.1U的UNG酶，能够消除 10 7 带有 dUTP 的、大于 6 个碱基的双链DNA 污染。

•  反应条件： 37℃ ，2分钟；反应 buffer: 20mM Tris-HCl(PH:8.0); 1mM EDTA; 1mM DTT;60度以上可以灭活。

UNG酶　（大宗用户价格面议，电话：021－54460831）

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反转录酶

常见的反转录酶主要有： M-MLV 、 AMV 、 Tth 。通常 MLV 用于普通的 RT 反应， AMV 用于基因比较复杂、有二级结构或 GC 含量较高的 RT 反应， T th 用于单酶体系、基因结构较复杂的 RT 反应；如果 cDNA 要用于克隆表达， 建议使用 MLV 或 AMV ；如果用于基因表达水平的检测或杂交探针的制备，建议使用 Tth 。

RT 反应，引物的选择

影响 RT 反应的因素

影响 RT 反应的因素比较多，主要是 RNA 的质量，要求没有 RNA 酶的污染、没有基因组的污染；另外还有引物的选择是否合适；酶的浓度是否合适等。

FicoScript®M-MLV Transcriptase(反转录酶)

FicoScript®Reverse Transcriptase（反转录酶） is an engineered version of M-MLV RT with reduced RNase H activity and increased thermal stability. The enzyme is purified to near homogeneity from E. coli containing the modified pol gene of Moloney Murine Leukemia Virus . The enzyme can be used to synthesize first-strand cDNA at temperatures up to 48°C, providing increased specificity, higher yields of cDNA, and more fulllength product than other reverse transcriptases. It can generate cDNA from 100 bp to >12 kb.It is suitable for qPCR. 
1 、 Enzyme Storage Buffer: M-MLV Reverse Transcriptase is supplied in 20mM Tris-HCl (pH 7.5), 200mM NaCl, 0.1mM

EDTA, 1mM DTT, 0.01% Nonidet P-40 and 50% glycerol.

2 、 M-MLV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer: When the M-MLV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer supplied with this enzyme is diluted 1:5, it has a composition of 50mM Tris-HCl (pH 8.3 25°C ), 75mM KCl, 3mM MgCl 2 and 10mM DTT.

3 、 Source: Purified from an E. coli strain expressing a recombinant clone.

4 、 Storage Conditions: Store at – 20°C . Avoid exposure to frequent temperature changes.

5 、 Unit Definition: One unit is defined as the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1nmol of deoxynucleotide into acid-precipitable material in 10 minutes at 37°C . The reaction conditions are: 50mM Tris-HCl (pH 8.3), 7mM MgCl 2 ,

40mM KCl, 10mM DTT, 0.1mg/ml BSA, 0.5mM [ 3 H]dTTP, 0.025mM oligo(dT) 50 , 0.25mM poly(A) 400 and 0.01% NP-40.

6 、 Usage Note: M-MLV Reverse Transcriptase is less processive than AMV Reverse Transcriptase, and therefore, more units of the M-MLV enzyme are required to generate the same amount of cDNA as in the AMV reaction. Thus, starting with 1μg of mRNA

in a first-strand cDNA synthesis, 200 units of the M-MLV enzyme are recommended as opposed to 25 units of the AMV enzyme.

反转录酶　（大宗用户价格面议，电话：021－54460831）

AMV Transcriptase(反转录酶)

1 、 AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer: The AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer supplied with this enzyme has a composition of 250mM Tris-HCl (pH 8.3 25°C ), 250mM KCl, 50mM MgCl 2 , 2.5mM spermidine and 50mM DTT.

2 、 Enzyme Storage Buffer: AMV Reverse Transcriptase (AMV-RT) is supplied in 200mM potassium phosphate (pH 7.2 4°C ), 0.2% Triton ? X-100, 2mM DTT and 50% glycerol.

3 、 Source: Purified from avian myeloblastosis virus particles.

4 、 Storage Conditions: Store at – 20°C . Avoid multiple freeze-thaw cycles and exposure to frequent temperature changes.

5 、 Unit Definition: One unit is defined as the amount of enzyme required to catalyze the transfer of 1nmol of deoxynucleotide into acid-precipitable material in 10 minutes at 37°C . The reaction conditions are: 50mM Tris-HCl (pH 8.3), 40mM KCl,

8.75mM MgCl 2 , 10mM DTT, 0.1mg/ml acetylated BSA, 1mM radiolabeled dTTP and 0.25mM poly(A):oligo(dT).

6 、 Usage Notes: The AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer is intended for use in standard first-strand cDNA synthesis reactions. No deoxynucleotides are in the buffer; The formulation of AMV Reverse Transcriptase 5X Reaction Buffer is not compatible with M-MLV Reverse Transcriptase. Up to 10μl of an RT reaction containing AMV-RT and the supplied AMV Reverse Transcriptase Reaction Buffer can be added

to PCR amplification reactions that use TaqDNA Polymerase.

Rnasin(核糖核酸酶抑制剂或RNA酶抑制剂)

RNA酶抑制剂概述
RNasin 是从人胎盘中提取的特异性RNA酶抑制剂，分子量为 51,000 道尔顿的蛋白质，等电点 pH 值为 4.7 。它能特异地与 RNase 以 300 的抑制常数 (ki) 以非共价键结合形成复合体而使 RNase 失去活性。在缓冲液为 0 -0.5M NaCl ， pH5-8 的条件下保持其活性， pH7.8 时活性最高。经严格质量检验，该产品为电泳纯，无 RNase 、 Nickase 污染，比活为 100,000 单位 / 毫克蛋白，达到国际标准。

RNA酶抑制剂特性
1. 抑制一般的真核 RNase 包括 RNaseA 、 B 、 C 和人胎盘 RNase ；
2. 不抑制 RNase H ， S1 核酸酶， SP6 ， T7 和 T3 RNA 聚合酶， AMV 或 M-MLV 反转录
酶， Taq DNA 聚合酶， RNase T1 ；
3. 活性 pH 范围宽广，但需要 1mM DTT 以保持其活性。

RNA酶抑制剂应用
1. 用在有潜在 RNase 污染的地方。
2. 在 cDNA 合成中保护 mRNA 。
3. 体外转录系统、翻译系统，保护 mRNA 。
4. 用于多核糖体的活性、产量增加。

5. 增进体外病毒复制。
6. 促进同源体系中的 RNA 翻译。
7. 制备无 RNase 的抗体。
8. 提高 Riboprobe (R) 系统 RNA 合成反应的得率。
浓度 20-40u/ul 。
RNA酶抑制剂单位定义
抑制 5ng RNase A 活性的 50 ％所需酶量为一单位。

储藏缓冲液

20mM HEPES-KOH pH7.6, 50mM KCl, 8mM DTT, 50% 甘油。

RNA酶抑制剂对核酸酶的选择性抑制

RNA酶抑制剂的性质    

RNA酶抑制剂　（大宗用户价格面议，电话：021－54460831）

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