PCR,RT-PCR相关酶
一步法RT-PCR试剂(大量供应)
编号 |
规格 |
售价¥
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说明书下载 |
ZK00101 |
10个 |
150.00 |
一步法RT-PCR |
ZK00102 |
50个 |
600.00 |
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1.
取103-106拷贝的特异目的模板或1pg-1μg的总RNA或1-10ng纯化的mRNA于一支0.2或0.5ml离心管中,65-70℃保温5-10分钟,离心数秒,放置冰浴中。(此步骤是为了变性RNA建议保留)。
2.
反应体系的配制:以下浓度仅供参考,以自己的实验条件为准。
组分
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体积
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终浓度
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2×反应缓冲液
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25μl
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1× |
上游引物*(25pmol/ul)
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1.2ul |
0.2-1μM
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下游引物*(25pmol/ul)
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1.2ul |
0.2-1μM
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荧光探针*(25pmol/ul)
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0.5ul |
0.05-0.4uM
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RT酶
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3μl
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RNA样品或对照**
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Yμl |
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DEPC-ddH2O(加至终体积为50μl) |
Xμl |
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终体积
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50μl |
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按照指定的体积将DEPC-ddH2O、2x反应缓冲液、RT酶、特异上下游引物探针加入到置于冰上的0.2ml薄壁反应管中,配制成反应混合物,将反应管轻柔震荡10秒以使该混合物混匀。每次加样均应使用单独的加样器枪头,小心勿使样品之间相互污染。
*
计算引物为50pmol时所对应的质量(纳克)的通用公式为:50pmol=16.3ng×bp;bp为引物碱基数目。对于阳性对照反应,上、下游对照引物均使用3.3μl(50pmol).
**103-106拷贝的特异目的模板或1pg-1μg的总RNA。使用2μl带有载体的阳性对照RNA(2.5
attomole或1×106个拷贝)。
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